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基因工程载体
作者:佚名    文章来源:本站原创    点击数:3112    更新时间:2007/7/17
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工程运载体
目的基因在经过体外改造后,必须进人受体细胞内才能进行扩增和生物表达。但是用于DNA重组体的目的基因,不能直接引人受体细胞。因为每种生物都是长期进化的产物,具有很强的排他性。外源DNA如果单独进人受体细胞,必将被破坏。因此,必须有一种运载基因的载体作媒介物,才能达到目的。载体在基因工程中的作用,就像过河时必须有船一样。载体运载外源DNA进人受体细胞,是通过在载体自身的DNA核酸序列中插人外源DNA,再进人受体细胞内进行复制,在载体DNA复制时,外源DNA分子也获得了扩增和表达。

目前经常使用的载体,有质粒和病毒两类。各种不同的载体,尽管分子量大小、结构和用途上存在着较大的差异,但是作为载体,它们应该具备一些共同的特性:

能在受体细胞内进行独立和稳定的DNA自我复制。在其DNA插人外源基因后,仍然保持稳定的复制状态和遗传特性;
易于从宿主细胞中分离,并进行纯化;
在其DNA序列中,具有适当的限制性内切酶位点。这些位点位于DNA复制的非必需区内,可在这些位点上插人外源DNA,但不影响载体自身DNA的复制;
具有能够观察的表型特征,在插入外源DNA后,这些表型特征可以作为重组DNA的选择标志。
质粒是细菌内独立于染色体并能自我复制的小环状DNA分子,是在细菌细胞分裂时能稳定传递给子代的遗传因子。由于细菌是一种简单的生物,对自身活动调控的机制并非绝对完美无缺,于是它为人们巧妙施用基因偷换术提供了可能。因此,我们可以借助于质粒,将基因或基因群带人细菌细胞并使其遗传信息得以表达,改变或修饰寄主细菌原有的代谢产物或产生新的物质。大肠杆菌和它的质粒DNA是DNA重组技术中最理想的载体系统,常常用来做建立基因的基因库或当作有用物质的生产车间。

除了质粒之外,细菌病毒,也就是噬菌体病毒等也可以作为载体。但是,质粒和病毒在作为基因工程载体时是有所区别的。利用病毒作为基因运载体时,所带的基因一般还需要转到受体细胞的染色体DNA中去,才能成为稳定的结构。质粒的情况也可以是这样,但大多数情况下不是如此。质粒一旦带有人所需要的新基因,它本身就可能成为一种稳定的重组DNA。进人受体细胞后,它多半不需要把所带的基因转到受体细胞的染色体上去,这样的质粒就会进行自我复制,异源性DNA也得到了复制。这就是利用质粒作为基因运载体表现优越的地方。所以目前进行的基因工程操作,多用质粒作为基因的运载体。
文章录入:zhimakaimen    责任编辑:zhimakaimen 
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