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可溶性还原糖的鉴定及班氏试剂与斐林试剂的比较
作者:佚名    文章来源:本站原创    点击数:3898    更新时间:2007/5/12
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可溶性还原糖的鉴定:

生物组织中普遍存在的可溶性糖种类较多,常见的有葡萄糖、果糖、麦芽糖。葡萄糖、果糖和麦芽糖的分子内含有醛基,醛基具有还原性,可与弱氧化剂反应。与醛基有特定颜色反应的化学试剂可用来鉴定这三种糖的存在。

(1)利用斐林试剂:斐林试剂由质量浓度为0.1g/mLNaOH溶液和质量浓度为0.05g/mLLCuSO4溶液配制而成,二者混合后,立即生成淡蓝色的Cu(OH)2沉淀。Cu(OH)2在加热条件下与醛基反应,被还原成砖红色的Cu2O沉淀,醛基则被氧化为羧基。可见用斐林试剂只能鉴定还原性糖,不能鉴定可溶性的非还原性糖。用斐林试剂鉴定可溶性还原糖时,溶液的颜色变化过程为:浅蓝色棕色砖红色(沉淀)

(2)利用班氏试剂:班氏试剂由A(硫酸铜溶液)B(柠檬酸钠和碳酸溶液)配制而成。将A溶液倾注人B液中,边加边搅,如有沉淀可过滤。实验原理与斐林试剂相似,所不同的是班氏试剂可长期使用。

(3)利用银氨溶液:银氨溶液是在2%的AgNO3溶液中逐滴滴人2%的稀氨水,至最初产生的沉淀恰好溶解为止,这时得到的溶液就是银氨溶液。银氨溶液中含有Ag(NH3)2OH(氢氧化二氨合银),这是一种弱氧化剂,能把醛基氧化成羧基,同时Ag+被还原成金属银。还原生成的银附着在试管壁上,形成银镜。可见,银镜反应也可用于鉴定可溶性还原糖。鉴定的结果是出现银镜。

班氏试剂与斐林试剂的比较:

首先,两者的配方不一样。斐林试剂主要由质量浓度为0.1g/mLNaOH溶液和质量浓度为0.05g/mLCuSO4溶液配制而成。其中0.1g/mLNaOH溶液称为斐林试剂甲,0.05g/mLCuSO4溶液称为斐林试剂乙。而班氏试剂的配方为:①400mL水中加85g柠檬酸钠和50g无水碳酸钠;②50mL加热的水中加入8.5g无水硫酸铜,制成CuSO4溶液;③把CuSO4溶液倒入柠檬酸钠和碳酸钠溶液中,边加边搅,如产生沉淀可滤去。

其次,两者在反应原理上略有差别。利用斐林试剂鉴定时,斐林试剂甲和斐林试剂乙直接反应产生氢氧化铜,氢氧化铜和可溶性还原糖反应产生砖红色沉淀。而班氏试剂中氢氧化铜的产生却是这样的:柠檬酸钠和碳酸钠均为强碱弱酸盐,在水中它们均可水解产生OH-,柠檬酸钠和碳酸钠溶液与硫酸铜溶液混合时,Cu2+OH-结合,生成氢氧化铜,氢氧化铜与葡萄糖中的醛基反应产生砖红色沉淀。

第三,两种试剂的保存方式不同。斐林试剂甲和斐林试剂乙可强烈反应产生氢氧化铜,氢氧化铜很容易沉淀析出,因此斐林试剂一般为现用现配;而班氏试剂的配方中,柠檬酸钠和碳酸钠溶液产生的OH-数量有限,与硫酸铜溶液混合后产生的氢氧化铜浓度相对较低,不易析出,因此该试剂可长期保存。

第四,用班氏试剂鉴定可溶性还原糖,比用斐林试剂更简便。斐林试剂要现配现用,否则实验难以得到满意结果,因为此反应利用的是斐林试剂中的Cu(OH)2产物作为弱氧化剂参与与还原糖的反应,而我们知道,Cu(OH)2是一种沉淀物质,放置过久沉淀过多则不利于反应,而班氏试剂是斐林试剂的改良,它利用柠檬酸作为Cu2+的络合剂,使溶液稳定、灵敏度高且可以长期使用,故更简便。

无论利用班氏试剂还是斐林试剂,归根结底都是氢氧化铜与醛基反应而生成砖红色的氧化亚铜沉淀,因此两者反应现象一样。

另外,利用斐林试剂或班氏试剂都可以进行尿糖检测:

实验原理  尿液中葡萄糖属可溶性还原糖,可以用班氏试剂或斐林试剂检验。

材料器具  人体新鲜尿液,试管,酒精灯,试管夹,火柴,滴管,班氏试剂。

步骤

(1)在试管中加入1mL班氏试剂,加热到沸腾,如不变色,则可使用。

(2)再在试管中滴人2滴新鲜澄清的尿液,摇匀。

(3)加热上述混合液到沸腾,并持续2min3min

(4)观察试管内混合液颜色是否发生变化,是否有沉淀物产生,并按下表提示作出判断记录。

混合液现象

记录符号

含糖量

混合液呈蓝色或蓝灰色

-

0.02g/100mL

出现浅黄绿色沉淀

+

0.10.5g/100mL

出现黄绿色沉淀

++

0.51.4g/100mL

出现黄色沉淀

+++

1.42.0g/100mL

出现橘黄色沉淀

++++

2.0g/100mL

注意事项:

(1)班氏试剂和尿液混合液的体积比例应为101

(2)如是糖尿病人,检验前两三天最好停止服药。

 

http://dlgzswjs.blog.edu.cn/user2/dlgzswjs/archives/2006/1251826.shtml

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