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实验十八 植物染色体压片技术
作者:生科院植…    文章来源:西北农林科技大学    点击数:2148    更新时间:2010/7/13
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一、目的和要求


    根尖染色体压片法是观察植物染色体最常用的方法,也是研究染色体组型、染色体分带、染色体畸变和姊妹染色单体交换的基础。所以掌握植物体细胞染色体的压片技术对于细胞学分类至关重要。

二、仪器和材料

    染色板,载玻片,盖玻片,试剂瓶,指管,滴瓶,镊子,解剖针,吸水纸,生物显微镜;无水酒精,70%酒精,冰醋酸,对二氯苯或秋水仙素,醋酸钠,碱性品红,石碳酸,甲醛,山梨醇,纤维素酶,中性树胶或油派胶,二甲苯;大蒜(Allium sativum)、洋葱(Allium cepa)的鳞茎或蚕豆(Vicia faba)的种子。

三、实验内容和方法


    1.将大蒜或洋葱鳞茎置于盛水烧杯上,放在25℃温箱中,待根长到2cm左右时,在上午九时摘下根尖,放到对二氯苯饱和水溶液或0.02% 秋水仙素溶液中,浸泡处理3~4h。

    2.经过前处理的根尖,再放到卡诺氏固定液中,固定24h,固定材料可转入70%酒精中,在4℃冰箱中保存,保存时间最好不要超过二个月。

    3.解离:可根据实验需要选择下列方法之一。

    (1)酸解:从固定液中取大蒜或洋葱根尖,用蒸馏水漂洗,再放到0.1mol/L HCl中,在60℃水浴中解离8~10min,用蒸馏水漂洗后,放在染色板上,加几滴改良石碳酸品红染色液,根尖着色后即可压片观察。

    (2)酶解:取大蒜或洋葱的固定根尖,放在0.1mol/L醋酸钠中漂洗,用刀片切除根冠以及延长区(根尖较粗的蚕豆,可以把根尖分生组织切成2~3片),把根尖分生组织放到醋酸钠配制的纤维素酶(2%)和果胶酶(0.5%)的混合液中,在28℃温箱中解离4~5h,此时组织已被酶液浸透而呈淡褐色,质地柔软而仍可用镊子夹起,用滴管将酶液吸掉,再滴上0.1mol/L醋酸钠,使组织中的酶液渐渐渗出,再换入45% 醋酸。

酶解后的根尖,如作分带或姊妹染色单体交换,可用45% 醋酸压片;如作核型分析或染色体计数等常规压片,可放在改良石碳酸品红中染色,经过酶处理的组织染色速度快。

    4.压片:把染色后的根尖放在清洁载玻片上,用解剖针把根冠及延长区部分截去,加上少量染色液,盖上盖玻片。一个解离良好的材料,只要用镊子轻轻敲打盖玻片,分生组织细胞就可铺成薄薄一层,再用吸水纸把多余染色液吸干。进行镜检后选择理想的分裂细胞,再在这个细胞附近轻轻敲打,使重叠的染色体渐渐分散,就得到理想的分裂相。

    5.封片:把压好的玻片标本放在干冰或冰箱结冰器里冰结,然后用刀迅速把盖玻片和载玻片分开,用电吹风把玻片吹干后,滴上油派胶加盖玻片,或经二甲苯透明后,滴中性树胶,加盖玻片封片做成永久封片。

四、课堂作业

    1.拍摄根尖染色体的分裂相,并记录大蒜或洋葱染色体数目。


    注

    (1)卡诺氏固定液的配制:用3份无水酒精,加入1份冰醋酸(现配现用)

    (2)酶液的配制:以0.1mol/L醋酸钠为溶剂,配制纤维素酶(2%)和果胶酶(0.5%)的混合液。

    (3)染色液的配制:

        ① 配方Ⅰ:石碳酸品红(Carbon fuchsia),先配母液A和B.

    母液A:称取3g碱性品红,溶解于100ml的70% 酒精中(此液可长期保存)

    母液B:取母液A 10ml,加入90ml 5% 石碳酸水溶液(2周内使用)

    石碳酸品红染色液:取母液B 45ml,加入6ml冰醋酸和6ml 37% 甲醛。此染色液含较多的甲醛,在植物原生质体培养过程中,观察核分裂比较适宜,后来在此基础上,加以改良的配方Ⅱ称为改良石碳酸品红,普遍用于植物染色体压片技术。

        ② 配方Ⅱ:改良石碳酸品红

    取配方Ⅰ石碳酸品红染色液2~10ml,加入90~98ml 45% 醋酸和1.8g山梨醇。此染色液初配好时颜色较浅,放置2周后,染色能力显著增强,在室温下不产生沉淀而较稳定。

五、思考题

    1. 根据有关资料,试述被子植物体细胞染色体数目的变化趋势

    2. 请说明染色体基数对植物科学分类有何帮助?



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